逆轉(zhuǎn)錄病毒
逆轉(zhuǎn)錄病毒(Retrovirus),又稱反轉(zhuǎn)錄病毒,是一種RNA病毒,其兩端為長(zhǎng)末端重復(fù)序列(LTR)。該病毒呈球形,有包膜,表面有刺突,顆粒直徑為100nm左右。逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組有三個(gè)基因:Gag-編碼病毒的核心蛋白;Pol-編碼逆轉(zhuǎn)錄酶;Env-編碼病毒的被膜糖蛋白。
逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝及侵染細(xì)胞過(guò)程
逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝采用三質(zhì)粒或四質(zhì)粒系統(tǒng)進(jìn)行包裝,收集細(xì)胞培養(yǎng)上清,通過(guò)超速離心濃縮純化和收集病毒。
滴度檢測(cè)方法:定量PCR檢測(cè)干擾后細(xì)胞基因組中外源DNA拷貝數(shù)。
滴度檢測(cè)原理:逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)外源基因以逆轉(zhuǎn)錄方式整合進(jìn)目的細(xì)胞基因組。
逆轉(zhuǎn)錄病毒基因表達(dá)時(shí),需在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下首先將RNA逆轉(zhuǎn)錄成DNA,形成DNA整合前復(fù)合體,隨后進(jìn)入細(xì)胞核隨機(jī)整合到宿主細(xì)胞DNA上,經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄、翻譯,完成基因的表達(dá)。
逆轉(zhuǎn)錄病毒特點(diǎn)
逆轉(zhuǎn)錄病毒的最大特點(diǎn)在于其特異性感染分裂期細(xì)胞,這是因?yàn)橹挥挟?dāng)被感染細(xì)胞處于細(xì)胞分裂期間,逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA基因組才能接觸到宿主細(xì)胞的遺傳物質(zhì)。
基于上述特性,逆轉(zhuǎn)錄病毒適用于干細(xì)胞相關(guān)的大量研究,如神經(jīng)干細(xì)胞研究、造血干細(xì)胞研究。體內(nèi)應(yīng)用時(shí),逆轉(zhuǎn)錄病毒適用于研究成年新生神經(jīng)元或膠質(zhì)前體細(xì)胞的工作。
逆轉(zhuǎn)錄病毒應(yīng)用案例
1、客戶發(fā)表文章:Scientific Reports. (IF=4.122). Xiong Y S,et.al. (2015). Early treatment of minocycline alle-viates white matter and cognitive impairments after chronic cerebral hypoperfusion. [逆轉(zhuǎn)錄病毒, 卒中]
注射部位:小鼠側(cè)腦室SVZ區(qū)
載體:pROV-EF1a-GFP
病毒載體:逆轉(zhuǎn)錄病毒
病毒滴度:1E+8cfu/mL
注射體積:1ul
2、應(yīng)用案例:Nature.(IF=41.577).Yu YC,et.al. (2009).Specific synapses develop preferentially among sister excitatory neurons in the neocortex. [逆轉(zhuǎn)錄病毒, 發(fā)育]
注射部位:E12-E13小鼠胚胎
病毒載體:逆轉(zhuǎn)錄病毒
注射體積:1ul
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